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pP1C.3单子叶植物敲除试剂盒
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❀pP1C.3质粒图谱 ❀pP1C.3 部分序列（U3 Promoter 及靶点插入位置）： 5’…..GAATTCAAGGGATCTTTAAACATACGAACAGATCACTTAAAGTTCTTCTGAAGCAACTTAAAGTTATCAGGCATGCATGGA
黄色底纹标示的序列：OsU3 Promoter 红色粗体标示为转录起始位点：A Xba I 位点：tctaga 靶点插入位置：tctagaGCCtctaga 下划线标示的序列：sgRNA ❀产品规格
以拟南芥AtRAN1基因为例进行oligo实操设计 （1）您可以通过以下在线工具设计： CRISPR Design：http://cbi.hzau.edu.cn/cgi-bin/CRISPR （2）选取 atttttcagGCTCTACCTAACCAGCAAACCGTAGATTATCCCAGCTTCAAGCTTGTCATTGTTGGTGATGGAGGCACAGgtacggt （3）输入序列信息（以拟南AtRAN1基因为例） 4）点submit，出现右侧结果； 5）根据左边不同Guide序列score的高低选取合适的Guide序列，score的高低并不代表敲除效率的高低，所以为提高敲除的成功率，一般选择2-3个Guide序列，构建2-3个敲除载体。
Q&A Q-1：在进行植株的敲除载体构建前，还需要做哪些准备工作？ A-1：需要目的基因的表达情况分析，为防止因染色体缺失等情况导致靶基因缺失，首先需要 PCR 扩增靶基因，并对 PCR 结果进行测序，确保靶基因的完整存在；其次，您还可以用 RT-PCR 分析靶基因的活跃度。 Q-2：植物敲除试剂盒中的质粒能否在大肠杆菌中复制扩增？若将载体构建交予你们做，怎么收费？ A-2：试剂盒中的质粒能够在大肠杆菌中复制扩增，若您希望长期使用该质粒，建议在收到货后即转化至大肠杆菌中以利于长期保存和使用。敲除载体构建服务我们的收费标准是1800元/个，完成后仅提供构建完成的敲除载体和测序结果，而不提供构建的原载体以及中间载体。因敲除载体构建的特殊性，我们仅对构建的载体负责，不保证最终的敲除效果；一般的，我们建议设计2~3个不同的靶点对目的基因进行敲除。若您预期长期使用CRISPR/Cas9技术进行基因组编辑，我们推荐能购买试剂盒产品。 |
